روشی با کارایی بالا برای جداسازی پروتوپلاست از کشت‌های درون شیشه‌ای و ریشه‌های موئین Maesa lanceolate

قیمت: 38,000 تومان

دانلود رایگان مقاله

خرید ترجمه مقاله

عنوان فارسی

روشی با کارایی بالا برای جداسازی پروتوپلاست از کشت‌های درون شیشه‌ای و ریشه‌های موئین Maesa lanceolate

عنوان لاتین

High efficiency protoplast isolation from in vitro cultures and hairy roots of Maesa lanceolata

کشت‌ درون شیشه‌ای گیاه دارویی Maesa lanceolata برای ایجاد امکان کشت ماده‌ی گیاهی با هدف تولید پروتوپلاست استقرار یافت. کشت کالوس با استفاده از برگ‌های جمع آوری شده از کشت‌ راس شاخه‌ها آغاز شد و نوک ریشه‌ها از کشت ریشه‌های مویین بدست آمده از تراریختی با باکتری Agrobacterium rhizogenes بدست آمد. به منطور جداسازی پروتوپلاست، ریزنمونه‌های مختلف در مجاورت ترکیبی از آنزیم‌ها شامل 5/1% سلولاز، 10-R macerozyme 5/0 % و M 5/0 مانیتول قرار گرفتند. حدود 106× 6 پروتوپلاست در گرم وزن تر از مواد برگی و 105× 5 پروتوپلاست در گرم وزن تر از کالوس بدست آمد. برای دستیابی به مقادیر بالایی از پروتوپلاست‌ در ریشه‌‌های موئین، این کشت‌ها با اکسین ایندول- 3- بوتیریک اسید (IBA) پیش تیمار شدند. این ماده، تشکیل ریشه‌های جدید را القا می‌کند. با استفاده از ریشه‌های جداسازی شده به عنوان مواد اولیه، 105× 5 پروتوپلاست در گرم وزن تر در هر تیمار بدست آمد. روش جداسازی پروتوپلاست، امکان مطالعات بیشتر بر روی تراریختی و امتزاج پروتوپلاست‌ها را در گیاه M. lanceolate فراهم می‌کند.

In vitro cultures of the medicinal plant Maesa lanceolata were established to enable the cultivation of plant material for the production of protoplasts. Callus cultures were initiated using leaves collected from shoot cultures and the root tips from hairy root cultures obtained upon Agrobacterium rhizogenes transformation. For the isolation of protoplast, the different explant material of M. lanceolata was exposed to an enzyme mixture consisting of 1.5% cellulase, 0.5% macerozyme R-10 and 0.5 M mannitol. About 6 x 106 protoplasts g-1 fresh weight were obtained from leaf material and 5 x 105 protoplasts g-1 fresh weight from callus. To obtain high amounts of hairy root protoplasts, the cultures were pretreated with the auxin indole-3-butyric acid (IBA) that stimulated the formation of novel root tips. Using the dissected root tips as starting material, 8 x 105 protoplasts g-1 fresh weight were obtained per preparation. The protoplast isolation method will enable further studies on the transformation and fusion of protoplasts from M. lanceolata.